外泌體組學(xué)

在利用外泌體運輸PTX進(jìn)行抗中流的研究中，由于間充質(zhì)干細胞可以歸巢(homing)至中流細胞微環(huán)境并且可以不通過(guò)基因操作即可對PTX運輸，因此Pessina等采用間充質(zhì)干細胞SR4987作為分泌外泌體的母代細胞，而后將SR4987與PTX共混，使SR4987分泌的外泌體含有PTX，再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來(lái)，研究其對體外人胰腺ai細胞株的影響。結果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能，小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047～0.095mg/mL之間時(shí)可以誘導中流細胞凋亡50%，這種抑制效果與純PTX對體外ai細胞的抑制效果相當。外泌體并作為癥狀早期診斷技術(shù)，應用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。外泌體組學(xué)

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì )影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不寬泛。唾液外泌體提取試劑盒分類(lèi)抗體親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體。

細胞分泌外泌體的過(guò)程一般分為三個(gè)階段:(1)質(zhì)膜內陷,形成早期內吞小泡;(2)內吞小泡向內萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內容物,形成外泌體。外泌體具有獨特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構成,另有與細胞來(lái)源相關(guān)的部分特殊脂類(lèi)。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來(lái)源外泌體所共有,只有小部分與其來(lái)源有關(guān),為其分泌細胞的特有蛋白,能夠反映分泌細胞的類(lèi)型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運輸到靶細胞,發(fā)揮相應的生物學(xué)功能。

胃病作為一種常見(jiàn)的惡性瘤,在亞洲具有較高的發(fā)病率.胃病的臨床診斷方法與結腸病相同,主要依靠?jì)雀Q鏡,早期胃病的癥狀并不明顯,且臨床常用的瘤標志物對胃病患者特異性與敏感性均較差,因此,胃病往往發(fā)現于晚期,并伴有不同程度的轉移。研究者發(fā)現胃病細胞高表達CD97并可經(jīng)外泌體分泌的方式調節瘤細胞的MAPK信號通路,促進(jìn)瘤細胞的增殖與侵襲。外泌體中CD97的檢測成或許能成為一種有潛在價(jià)值的胃病診療工具。胃病細胞能選擇性地將let-7包裝到外泌體中,并釋放至周?chē)h(huán)境中,促進(jìn)胃病的惡性進(jìn)展。胃病細胞外泌體可作用于抗瘤的T細胞,抑制AKT的活性。外泌體與免疫細胞之間的相互作用揭示了瘤抑制免疫功能的潛在機制。在另一項被認為有潛在胃病診斷價(jià)值的lnRNA的研究中,通過(guò)對胃病患者、胃上皮異型增生與健康人的比較發(fā)現,LINC00152在胃病患者的血液中可被檢測到高表達,且手術(shù)前后有明顯變化。血清LINC00152主要存在于外泌體中,在外泌體的保護下,可以穩定保存,血清外泌體LINC00152具有胃病標志物的潛能。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。

由于卵巢中流細胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸（phosphati[1]dylserine，PS）可以外泌體形式分泌入血，惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對照者，因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點(diǎn)也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細胞瘤患者診斷的支持證據。2020年，DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團隊合作，通過(guò)探究來(lái)自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個(gè)人類(lèi)樣品中細胞外囊泡和顆粒（extracellularvesicleandparticle，EVP）的蛋白質(zhì)組學(xué)特征，鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白（特異度和靈敏度分別為95%和90%），并可區分患者的中流類(lèi)型，使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進(jìn)了一步。外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合，進(jìn)而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。江蘇外泌體miRNA測序

細胞表面受體表達不同，外泌體對受體細胞的影響可能不同，可能誘導細胞存活，也可能誘導凋亡或免疫調節等。外泌體組學(xué)

外泌體基礎醫學(xué)和臨床應用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過(guò)差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認為是外泌體分離的“金標準”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過(guò)結合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進(jìn)行超濾來(lái)提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉子類(lèi)型、旋轉半徑、沉降路徑長(cháng)度以及樣品黏度等多種因素影響。外泌體組學(xué)

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